Asins analīze vēdertīfam ar Vi antigēnu. Hemaglutinācijas tests (RHA) Citu infekcijas slimību diagnostika

Diagnostiskā seroloģiskā analīze, lai noteiktu antivielas pret vēdertīfa izraisītāja Vi-antigēniem asins serumā, ir paredzēta, lai apstiprinātu vai noliegtu pārvadāšanas faktu.

Termiņi	7-8 dienas

Sinonīmi (rus)	Seroloģiskā analīze vēdertīfa izraisītāja Vi-antivielu noteikšanai asins serumā

Sinonīmi (angļu)	Netiešā hemaglutinācijas pārbaude Salmonella typhi Vi antivielām

Analīzes metode	Netiešās hemaglutinācijas reakcija (RIHA)

Studiju sagatavošana	Analīze tiek veikta no rīta tukšā dūšā. Kopš pēdējās ēdienreizes ir jāpaiet vismaz 8 stundām.
	Izslēdziet alkohola lietošanu vismaz 24 stundas pirms biomateriāla ņemšanas.
	Nav ieteicams ziedot asinis seroloģijai pēc fluorogrāfijas, rentgena, fizioterapijas procedūrām.

Biomateriāls un tā ņemšanas metodes	Deoksigenētas asinis

Vispārīga informācija par vēdertīfu un tā noteikšanu

vēdertīfs attiecas uz akūtām infekcijas zarnu slimībām. To raksturo cikliska gaita ar sistēmiskiem zarnu orgānu, centrālās nervu sistēmas, aknu, limfātiskās sistēmas bojājumiem; vispārēja organisma intoksikācija, stabila bakterēmija, kurā tiek konstatēta baktēriju klātbūtne asinīs. Infekcijas avots ir slimi, slimi nesēji.

Vēdertīfa izraisītājs - Salmonella typhi, attiecas uz zarnu baktērijām.

Patogēna antigēnu sistēmu pārstāv O, H, Vi antigēni.

Vi antigēns ir virulences antigēns, veidojot vēdertīfa salmonellas izraisītāja rezistenci pret organisma aizsargreakcijām. Antivielu klātbūtne pret Salmonella typhi Vi-antigēniem asins paraugu seroloģiskās izpētes laikā kalpo kā bakteriopārvadātāja marķieris.

Vi-antigēna asins analīzes metode

Antivielu noteikšana pret eritrocītu Vi antigēniem tiek veikta, izmantojot Netiešās hemaglutinācijas seroloģiskā reakcija, RNGA izmantojot īpašu diagnostiku.

RNGA metode:

pamatojoties uz asins seruma antivielu un uz eritrocītiem fiksēto antigēnu mijiedarbības spēju (eritrocītu diagnostika); reakcijas rezultāts ir sarkano asins šūnu agregācija, kam seko sedimentācija, aglutinācija;
pēc eritrocītu nogulumu rakstura tiek vērtēta antivielu klātbūtne (raksturīgs "lietussargs") vai to neesamība (nogulsnes "punkta" formā);
ir puskvantitatīvs; reakcijas veikšanai diagnostikas titra noteikšanai izmanto asins seruma atšķaidījumus;
minimālais diagnostikas titrs reakcijas laikā ir 1:40;
tiek novērota reakcijas diagnostiskās vērtības palielināšanās, izmantojot atkārtotu analīzi (pāru serumu metode);
reakcija ir ļoti jutīga un specifiska, var lietot slimības piektajā līdz septītajā dienā.

Pētījuma galvenais mērķis ir identificēt vēdertīfa salmonellas baktēriju nesēju.

Analīzes rezultāti un to interpretācija

Testa rezultāti var būt pozitīvi vai negatīvi.

Pozitīva atbilde:

antivielu noteikšana pret vēdertīfa patogēna Vi-antigēniem asinīs (diagnostiskā titra minimālā vērtība 1:40) uzskatāma par norādi uz bakterionēsāja faktu un atkārtotas pārbaudes nepieciešamību;
titra vērtība ir fiksēta atbildē;
var norādīt uz akūtas infekcijas gaitu, pagātnes slimību, vakcināciju;
retos gadījumos tas var būt viltus pozitīvs krusteniskās reakcijas dēļ.

Negatīvā atbilde izsniedz, ja antivielas netiek atklātas. Līdzīga situācija ir iespējama gan tad, ja nav inficēšanās ar vēdertīfa patogēnu, gan slimības sākuma stadijā.

Šī pētījuma veikšana ir īpaši svarīga, lai novērstu baktēriju nesēju izraisītu vēdertīfa izplatīšanos.

Analīzes periods: līdz 7 dienām

Analīzes izmaksas: 710 rubļi.

Pievienot kalkulatoram

Iegūstiet testa rezultātus
Akcijas un atlaides
Pacienti
Ārstiem
Organizācijas
Zvaniet uz mājām un biroju
Kur veikt pārbaudi
Pilns analīžu saraksts
foto galerija

Jautājumi un atbildes

Analīzes izmaksasJautājums: Sveiki! Lūdzu, ierakstiet šādu testu izmaksas. Es plānoju īrēt Sočos Staronasypnaya st., 22, Adler mikrorajons, BC Office Plaza, fl. 2 Sievietei: 1. Iegurņa orgānu ultraskaņa menstruālā cikla 5.-8.dienā. 2. Asinsgrupas (ieskaitot Rh faktoru) noteikšana. 3. Klīniskā asins analīze, ieskaitot asins recēšanu 4. Bioķīmiskā asins analīze (ieskaitot glikozi, kopējo proteīnu, tiešo un netiešo bilirubīnu, urīnvielu) 5. Asins analīze sifilisa, HIV, B un C hepatīta noteikšanai 6. Koagulogramma (pēc indikācijām) 7 Urīna vispārējā analīze 8. Dzemdes un olvadu stāvokļa izpēte (laparoskopija, histerosalpingogrāfija vai histerosalpingoskopija) - pēc indikācijām. 9. Infekciozā izmeklēšana: - maksts izdalījumu, dzemdes kakla kanāla no urīnizvadkanāla bakterioloģiskā izmeklēšana (uztriepe florai) - mikroskopiskā dzemdes kakla kanāla izmeklēšana, lai noteiktu aerobos un fakultatīvos anaerobos mikroorganismus, Trichomonas, Candida ģints sēnītes (potēšana no plkst. dzemdes kakla kanāls) - PCR (hlamīdijas, urīnvielas un mikoplazmas, herpes simplex vīruss I-II tips, citomegalovīruss) (dzemdes kakla kanāls) - M, G klases antivielu noteikšana pret toksoplazmu, masaliņām (asinis) 10. EKG 11. Fluorogrāfija plaušās (derīga 12 mēnešus). 12. Terapeita konsultācija 13. Kolposkopija un dzemdes kakla citoloģiskā izmeklēšana. 14. Mammogrāfija (sievietēm virs 35 gadiem), piena dziedzeru ultraskaņa (sievietēm līdz 35 gadiem). 15. Hromosomu analīze precētiem pāriem, kas vecāki par 35 gadiem, sievietēm ar iedzimtām anomālijām un hromosomu slimībām anamnēzē, tostarp tuviem radiniekiem; sievietes ar primāro amenoreju. 16. Endometrija histeroskopija un biopsija (pēc indikācijām). 17. Hormonālā izmeklēšana: asinis 2-5 menstruālā cikla dienā: LH, FSH, prolaktīns, testosterons (st., kopējais), estradiols, progesterons, kortizols (800-1700), T3 sv, T4 sv, TSH, STH , AMG, 17-OP, DGA-S. asinis cikla 20-22 dienā: progesterons. 18. Endokrinologa konsultācija (pēc indikācijām). 19. Specializēto speciālistu slēdziens ekstragenitālās patoloģijas klātbūtnē (pēc indikācijām). 20. Vairogdziedzera un epitēlijķermenīšu, nieru un virsnieru dziedzeru ultraskaņa (pēc indikācijām). Vīrietim: 1. Asins analīze uz sifilisu, HIV, B un C hepatītu (pārbaudes derīgas 3 mēnešus). 2. Spermogramma un MAP tests 3. Ejakulāta mikroskopiskā izmeklēšana uz aerobiem un fakultatīviem anaerobiem mikroorganismiem, Trichomonas, Candida ģints sēnēm (ejakulāta kultūra) (testi derīgi 6 mēnešus). 4. PCR (hlamīdijas, urīnvielas un mikoplazmas, herpes simplex vīruss I-II tips, citomegalovīruss) (ejakulāts). 5. Androloga/urologa konsultācija.

Atbilde:

Sveiki! Pakalpojuma izmaksas:

Sievietei:

1. Iegurņa orgānu ultraskaņa menstruālā cikla 5.-8.dienā. - 1500 rubļi.

2. Asinsgrupas (ieskaitot Rh faktoru) noteikšana. - 490 rubļi.

3. Klīniskā asins analīze, - 460 rubļi. ieskaitot asins recēšanu (Asiņošanas laika pētījums (asiņošanas / recēšanas laiks)) - 220 rubļi.

4. Bioķīmiskā asins analīze (ieskaitot glikozi - 159 rubļi, kopējais proteīns - 159 rubļi, tiešais - 159 rubļi un netiešais bilirubīns - 159 rubļi, urīnviela - 159 rubļi)

5. Asins analīze uz sifilisu, HIV, B un C hepatītu - 1560 rubļi.

6. Koagulogramma (pēc indikācijām) - 820 rubļi.

RGA pamatā ir eritrocītu spēja salipt kopā, kad uz tiem tiek adsorbēti noteikti antigēni. Par hemaglutinācijas testa materiālu izmanto alantoīdu, amnija šķidrumu, vistu embriju horionalantoisko membrānu suspensiju, suspensijas un ekstraktus no ar vīrusiem inficētu dzīvnieku kultūrām vai orgāniem, native infekcijas materiālu. RGA nav seroloģiska, jo tā notiek bez imūnseruma līdzdalības un tiek izmantota, lai izvēlētos antigēna darba atšķaidījumu RTGA iestatīšanai vai antigēna (vīrusa) klātbūtni testa materiālā (piemēram, ar gripu). Reakcijā izmanto dzīvnieku, putnu eritrocītus, cilvēka I (0) asinsgrupu.

Lai izveidotu aptuvenu RGA, uz stikla priekšmetstikliņa uzklāj pilienu 5% eritrocītu suspensijas un pilienu testa materiāla, rūpīgi samaisot. Ar pozitīvu rezultātu pēc 1-2 minūtēm makroskopiski novērojiet eritrocītu flokulentas aglutinācijas parādīšanos.

Lai izveidotu RHA paplašinātā rindā polistirola plākšņu iedobēs, tiek sagatavoti divreiz pieaugoši testa materiāla atšķaidījumi fizioloģiskā šķīdumā 0,5 ml tilpumā. Visās mēģenēs ievietojiet 0,5 ml 0,25–1% eritrocītu suspensijas. Rezultāti tiek ņemti vērā pēc pilnīgas eritrocītu sedimentācijas kontroles (eritrocīti + fizioloģiskais šķīdums). Reakciju ņem vērā eritrocītu nogulumu raksturs. Pozitīvos gadījumos aglutinācijas pakāpe tiek atzīmēta ar plusiem. Četri plusi novērtē reakciju, kurai ir plānas salīmētu eritrocītu plēves forma, kas nosedz mēģenes dibenu (lietussargu), reakcija ar spraugām plēvē atzīmēta ar trīs plusiem, plēves klātbūtne ar mežģīņu malām. no salīmētajiem eritrocītiem norāda divi plusi, pārslains eritrocītu nogulsnes, ko ieskauj aglutinētu eritrocītu kunkuļu zona, atbilst vienam plusam. Strauji izteikti eritrocītu nogulumi, kas neatšķiras no kontroles, liecina par aglutinācijas neesamību. Titrs tiek uzskatīts par testa materiāla ierobežojošo atšķaidījumu, kas izraisīja eritrocītu aglutināciju par diviem plusiem.

Ar pozitīvu RHA rezultātu pētījums tiek turpināts, nosakot izolētā vīrusa veidu, izmantojot hemaglutinācijas inhibīcijas testu ar tipam specifiskiem serumiem.

RTGA pamatā ir antiseruma īpašība nomākt vīrusu hemaglutināciju, jo vīruss, ko neitralizē specifiskas antivielas, zaudē spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas. Aptuvenai vīrusu tipēšanai tiek izmantota pilienu metode uz stikla. Lai galīgi noteiktu izolētā vīrusa tipa piederību un titrētu antivielas serumos, mēģenēs vai iedobēs ievieto paplašinātu RTHA. Šim nolūkam fizioloģiskā šķīdumā sagatavo divkāršus seruma atšķaidījumus un ielej 0,25 ml. Seruma atšķaidījumiem pievieno vienu pilienu vīrusa saturoša materiāla un vienu pilienu 1% eritrocītu suspensijas.

Izmantojot RTGA vīrusa veida noteikšanai, tiek izmantoti tipam specifiski serumi, kurus pievieno vienādam tilpumam antigēna darba atšķaidījuma. Izolētā vīrusa piederību tipam nosaka specifiskais imūnserums, kas uzrādīja augstāko antivielu titru pret šo vīrusu.

RGA un RTGA plaši izmanto vīrusu infekciju (ērču encefalīta, gripas u.c.) diagnosticēšanai, lai noteiktu specifiskas antivielas un identificētu daudzus vīrusus pēc to antigēniem.

RTGA princips sastāv no tā, ka mēģenē tiek sajaukti vienādi tilpumi asins seruma un vīrusa suspensijas, un pēc iedarbības tiek noteikts, vai vīruss maisījumā ir saglabājies, pievienojot eritrocītu suspensiju. Eritrocītu aglutinācija norāda uz klātbūtni, un hemaglutinācijas neesamība norāda uz vīrusa neesamību maisījumā. Vīrusa izzušana no vīrusa + seruma maisījuma tiek uzskatīta par seruma un vīrusa antivielu mijiedarbības pazīmi.

Bet antivielas mijiedarbojas ar antigēniem stingri noteiktās kvantitatīvās attiecībās. Tāpēc, lai noteiktam vīrusa daudzumam tiktu liegta hemaglutinācijas spēja, ir nepieciešams noteikts antivielu minimums, un, tā kā viena no RTHA sastāvdaļām vienmēr nav zināma, reakcija ir jāievieto mēģenē. ar dažādām antivielu devām un vienādām vīrusa devām vai otrādi. To panāk, izmantojot dažādus seruma atšķaidījumus un vienu un to pašu vīrusa atšķaidījumu, vai arī dažādus vīrusa atšķaidījumus un vienu un to pašu seruma atšķaidījumu.

RTGA ļauj atrisināt šādus uzdevumus: noteikt hemaglutinējošā vīrusa antivielu titru serumā; identificēt nezināmu hemaglutinējošu vīrusu no zināmiem serumiem; noteikt abu vīrusu antigēnu attiecību pakāpi.

RTGA priekšrocības: tehnikas vienkāršība, ātrums, sterils darbs nav nepieciešams, specifika, zemas izmaksas. Trūkums: RTGA ir iespējama tikai ar hemaglutinējošiem vīrusiem.

Antivielu titrēšanas princips RTGA sastāv no sekojošiem:

- sagatavot virkni secīgu (parasti 2-kārtīgu) testa seruma atšķaidījumu vienādos tilpumos (parasti 0,25 vai 0,2 ml);

– katram atšķaidījumam pievieno tādus pašus homologa vīrusa tilpumus ar titru 4 HAU;

– maisījumus glabā noteiktu laiku noteiktā temperatūrā (Ņūkāslas slimības vīrusam 40-60 minūtes istabas temperatūrā);

– visiem maisījumiem pievieno vienādos daudzumos 1% mazgāto eritrocītu suspensijas;

- pēc iedarbības hemaglutināciju katrā maisījumā novērtē krustojumā.

Reakcija ietver seruma, vīrusu un eritrocītu kontroli.

Augstākais seruma atšķaidījums, kas joprojām pilnībā inhibē hemaglutināciju, tiek uzskatīts par antivielu titra indikatoru šajā serumā.

Izmanto hemadsorbcijas reakcijas virusoloģijā.

RGAd. Hemadsorbciju – eritrocītu savienojumu ar vīrusa skarto šūnu virsmu – pirmo reizi atklāja Vogels un Ščelokovs (1957) audu kultūrā, kas bija inficēta ar gripas vīrusu. Šīs parādības pamatā ir vīrusa receptoru, kas atrodas uz skartās šūnas virsmas, afinitāte ar eritrocītu receptoriem, kas izraisa to savstarpējo saikni, kas ir līdzīga hemaglutinācijas reakcijai. Šīs reakcijas priekšrocība ir tā, ka tā kļūst pozitīva pat pirms izteiktu citopātisko izmaiņu parādīšanās inficētajās šūnās.

RGAd metodoloģija sastāv no sekojošā. 3.–4. dienā pēc šūnu inficēšanās tiek ņemtas divas mēģenes ar vienādu šūnu kultūru, no kurām viena ir inficēta ar vīrusu saturošu materiālu, bet otrā ir kontroles mēģene. No abām mēģenēm nolej kultivēšanas šķidrumu un abās mēģenēs pievieno 2–3 pilienus 0,5% nomazgātu eritrocītu suspensijas. Abas mēģenes atstāj uz 5-10 minūtēm, lai eritrocīti atrastos uz šūnu virsmas (novieto horizontāli uz galda), un pēc tam nedaudz noskalo ar fizioloģisko šķīdumu un izmeklē mikroskopā (neliels palielinājums). Kontroles mēģenē eritrocīti tiek pilnībā noņemti ar fizioloģisko šķīdumu, un daži no atlikušajiem peld ar šķidrumu. Ja eritrocīti inficētajā mēģenē netiek izņemti ar fizioloģisko šķīdumu un nepeld, bet ir piestiprināti pie šūnu virsmas, RHAd jāuzskata par pozitīvu.

Atkarībā no vīrusa un šūnu veida sarkano asins šūnu izvietojums var būt trīskāršs:

- eritrocīti adsorbējas tikai šūnu slāņa perifērijā "kaklarotas" veidā (Āfrikas cūku mēra vīruss);

- eritrocīti atrodas uz šūnu slāņa perēkļos vai klasteros (gripas vīruss);

- eritrocīti difūzi atrodas uz šūnu slāņa (paragripas vīruss).

Katrs vīruss spēj adsorbēt noteiktu dzīvnieku sugu sarkanās asins šūnas.

Vīrusu slimību seroloģiskā diagnostika, palielinot antivielu titru sapārotajos asins serumos.

Hemaglutinācijas reakcija (RGA) un hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HITA), reakciju mehānisms, sastāvdaļas un pielietojums.

Hemaglutinācijas reakcijas pamatā ir eritrocītu aglutinācijas parādība, kas notiek dažādu faktoru ietekmē. Atšķiriet tiešu un netiešu hemaglutināciju.

Vispirms eritrocītus mazgā ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, pēc tam, ja nepieciešams (izmantojot proteīna antigēnus), tos apstrādā ar 1:20 000 tanīna šķīdumu un sensibilizē ar šķīstošiem antigēniem. Pēc mazgāšanas ar buferētu izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu eritrocītu antigēns ir gatavs lietošanai.

Testa serumus atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu mēģenēs vai speciālās plastmasas plāksnēs ar caurumiem, pēc tam katram seruma atšķaidījumam pievieno eritrocītu diagnostikas līdzekli. Netiešās hemaglutinācijas reakcijas rezultātus ņem vērā mēģenes apakšā izveidoto eritrocītu nogulumu raksturs. Par pozitīvu tiek uzskatīts reakcijas rezultāts, kurā eritrocīti vienmērīgi pārklāj visu mēģenes dibenu. Ar negatīvu reakciju sarkanās asins šūnas neliela diska vai "pogas" formā atrodas mēģenes dibena centrā.

Galvenās RP sastāvdaļas:

A) šķīstošs antigēns

B) Specifiskas antivielas (serums)

(RTGA) ir metode vīrusa identificēšanai vai pretvīrusu antivielu noteikšanai pacienta asins serumā, kuras pamatā ir eritrocītu aglutinācijas neesamība ar vīrusu saturošām zālēm pret to imūna asins seruma klātbūtnē.
pamatā ir imūnseruma antivielu bloķēšana, vīrusu antigēnu nomākšana, kā rezultātā vīrusi zaudē spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas.

RTHA izmanto daudzu vīrusu slimību diagnosticēšanai, kuru izraisītāji (gripa, masalas, masaliņas, ērču encefalīts u.c.) var aglutinēt dažādu dzīvnieku eritrocītus.
Mehānisms. Vīrusa tipizēšanu veic hemaglutinācijas inhibīcijas testā (HITA) ar tipam raksturīgu serumu komplektu. Reakcijas rezultāti tiek ņemti vērā, ja nav hemaglutinācijas. Vīrusa A apakštipi ar antigēniem H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 utt.

var atšķirt RTGA ar homologu tipam raksturīgu serumu komplektu.

Pamatā hemaglutinācijas reakcijas slēpjas eritrocītu aglutinācijas parādība, kas notiek dažādu faktoru ietekmē.

Atšķiriet tiešu un netiešu hemaglutināciju.
Tiešā hemaglutinācijas reakcijā eritrocīti salīp kopā, kad uz tiem adsorbējas noteikti antigēni, piemēram, vīrusi.
Seroloģiskajos pētījumos tiek izmantota tiešā hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija, kad no pacienta izolētais vīruss tiek neitralizēts ar specifisku imūnserumu un pēc tam apvienots ar sarkanajām asins šūnām.

Hemaglutinācijas neesamība norāda uz vīrusa un izmantotā imūnseruma atbilstību.

Netiešā hemaglutinācijas reakcija (pasīvā hemaglutinācija) tiek novērota, ja eritrocīti, kas iepriekš apstrādāti (sensibilizēti) ar dažādiem antigēniem, tiek papildināti ar imūnserumu vai pacienta serumu, kuram ir atbilstošas antivielas.

Notiek specifiska eritrocītu saistīšanās, to pasīvā hemaglutinācija.

Netiešās jeb pasīvās hemaglutinācijas reakcijai ir augstāka jutība un specifiskums salīdzinājumā ar citām seroloģiskajām metodēm, un to izmanto baktēriju, riketsijas un vienšūņu izraisītu infekciju diagnostikā.

Netiešās hemaglutinācijas reakcijas iestatīšanas metode sastāv no vairākiem posmiem.

Pēc mazgāšanas ar buferētu izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu eritrocītu antigēns ir gatavs lietošanai. Testa serumus atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu mēģenēs vai speciālās plastmasas plāksnēs ar caurumiem, pēc tam katram seruma atšķaidījumam pievieno eritrocītu diagnostikas līdzekli.

Netiešās hemaglutinācijas reakcijas rezultātus ņem vērā mēģenes apakšā izveidoto eritrocītu nogulumu raksturs. Par pozitīvu tiek uzskatīts reakcijas rezultāts, kurā eritrocīti vienmērīgi pārklāj visu mēģenes dibenu. Ar negatīvu reakciju eritrocīti neliela diska vai “pogas” formā atrodas mēģenes dibena centrā.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija- seroloģiska reakcija, kuras pamatā ir antivielu spēja novērst eritrocītu aglutināciju ar hemaglutinējošiem vīrusu veidiem (adenovīrusi, arbovīrusi, daži enterovīrusi, gripas un paragripas vīrusi, masalas, reovīrusi).

Specifiskas pretvīrusu antivielas mijiedarbojas ar šo vīrusu virionu hemaglutinīnu virsmas molekulām un bloķē to saistīšanos ar eritrocītu membrānas komplementārajām molekulām.

Pēdējā laikā reakciju plaši izmanto klīniskās virusoloģijas laboratorijās, lai noteiktu specifisku antivielu titrus pret noteiktiem vīrusiem, kā arī seroloģiskai identificēšanai un vīrusu izolātu tipizēšanai no pacientu klīniskā materiāla.

Lietošana ir nedaudz ierobežota, jo cilvēku asins serumā ir nespecifiski vīrusu inhibitori, kā arī dabiskās antivielas - aglutinīni.

Neitralizācijas reakcija – hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (RTGA).

RTGA tiek piemērota:
-vīrusu serotipēšanai;
- infekciju serodiagnostikai.
Ir divi iestatīšanas veidi:
- pilināšanas metode uz stikla (aptuvena reakcija), ko izmanto vīrusu serokopēšanai;
- izvietoti mēģenēs.

Mehānisms.

Dažiem vīrusiem (piemēram, gripai) ir hemaglutinīns, kas izraisa dažādu dzīvnieku eritrocītu aglutināciju atkarībā no vīrusa veida.

Ja serumā ir antivielas - antihemaglutinīni, tiek novērota vīrusu aktivitātes inhibīcija.
RTGA.
Mērķis: A gripas vīrusa serotipēšana

Sastāvdaļas:
1. Pētāmais materiāls ir cāļu embrija alantoiskais šķidrums,
2. Diagnostikas pretgripas tipam specifiski serumi,
3. 5% vistas eritrocītu suspensija.
4.

Sāls šķīdums.

Reakcija tiek novietota uz stikla ar pilienu metodi. Uz stikla uzklāj 1 pilienu diagnostisko serumu un testa materiālu, samaisa, tad pievieno 1 pilienu eritrocītu suspensijas. Ar pozitīvu reakciju tiek novērots viendabīgs apsārtums, un ar negatīvu reakciju parādās sarkanas pārslas (hemaglutinācija).

Iepriekšējais31323334353637383940414243444546Nākamais

gripas vīrusu īpašības. Gripas epidemioloģija un diagnostika. RTGA izmantošana gripas vīrusa serotipēšanai. Preparāti specifiskai profilaksei un ārstēšanai.

Gripa jeb gripa ir akūta infekcijas slimība, kurai raksturīgi augšējo elpceļu gļotādas bojājumi, drudzis, vispārēja intoksikācija, sirds un asinsvadu un nervu sistēmas darbības traucējumi.

Gripai ir raksturīga tendence uz epidēmisku un pandēmisku izplatību patogēna augstās lipīguma un mainīguma dēļ.

patogēnu īpašības. Patogēni - gripas vīrusi pieder pie ģimenes. Orthomyxoviridae, ģints Influenzavirus A, B un Influenzavirus C. Gripas vīrusi ir RNS vīrusi. A tipa gripas vīrusu 1933. gadā izolēja W. Smith, K. Andrews, P. Laidlaw. 1940. gadā T.

Hemaglutinācijas metodes pielietojums virusoloģijā.

Frensiss un R. Medžils izdalīja B tipa gripas vīrusus, 1949. gadā R. Teilors - C tipu. Krievijā pirmos gripas vīrusus 1936. gadā izdalīja A. A. Smorodincevs un piešķīra A tipam. Morfoloģija. Gripas vīrusiem ir sfēriska forma (bumbiņas forma) - 80 - 120 nm, retāk tiem ir pavedienu forma. Tie sastāv no: 1) kodola - spirālveida simetrijas tipa nukleokapsīda (vienpavedienu lineāra "-" -RNS virkne + proteīna kapsīds); 2) bazālā membrāna - ārējā lipoproteīnu membrāna - superkapsīds.

Uz membrānas virsmas atrodas 2 veidu glikoproteīni (smailu un bārkstiņu veidā): 1) hemaglutinīns - veicina piesaisti šūnu receptoriem; 2) neiraminidāze - veicina vīrusa izdalīšanos no šūnas. Audzēšana. Audzēšanai izmanto vistu embrijus, primārās tripsinizētās šūnu kultūras un dažreiz laboratorijas dzīvniekus.

Ērtākais modelis ir vistas embriji 10-12 dienu vecumā. Tas ļauj iegūt lielu daudzumu vīrusa, kas nepieciešams vakcīnu un baktēriju preparātu ražošanā.

Infekcija tiek veikta alontoiskā dobumā, uz horiona-allontoiskās membrānas, amnija dobumā, amnionā. Vīrusa klātbūtne vistas embrijā tiek noteikta hemaglutinācijas testā. Antigēna struktūra. Vīrusiem ir iekšējais antigēns - S un virsmas antigēni: HA-hemaglutinīns un NA-neiraminidāze. S-antigēns - grupai specifisks, kopīgs visam tipam, pēc šī antigēna gripas vīrusi tiek iedalīti A, B un C tipos. Tas ir komplementu fiksējošs, stabils (nemainīgs) antigēns.

HA un NA antigēni ir specifiski antigēni. HA antigēns izraisa vīrusu neitralizējošu antivielu veidošanos un eritrocītu aglutināciju.

NA antigēns izraisa antivielu veidošanos, kas daļēji neitralizē vīrusus.

B tipa vīruss ir mazāk mainīgs, savukārt C tips ir ļoti stabils.

toksiskas īpašības. Vīrusa toksiskā iedarbība uz organismu (galvassāpes, muskuļu sāpes, drudzis, katarāla parādība) ir saistīta ar vīrusa olbaltumvielām (pašu vīrusa daļiņu). Šī darbība ir stingri specifiska un tiek neitralizēta tikai ar atbilstošā tipa vai apakštipa imūnserumu vai slimo personu serumu. pretestība. Gripas vīrusi ir jutīgi pret UV stariem, dezinfekcijas līdzekļiem (formalīnu, spirtu, fenolu, hloramīnu) un tauku šķīdinātājiem.

Šķidrā vidē tie mirst 50–60 ° C temperatūrā vairākas minūtes. Istabas temperatūrā gaisā vīrusi paliek infekciozi vairākas stundas. Tos ilgu laiku uzglabā kaltētā veidā, un sasaldētā stāvoklī (-70 ° C) tie ne tikai saglabājas ilgu laiku, bet arī nezaudē savu virulenci.

dzīvnieku uzņēmība. Dabiskos apstākļos A tipa vīrusi inficē cilvēkus un dzīvniekus (saslimst zirgi un cūkas), bet B un C tipa vīrusi inficē tikai cilvēkus. No laboratorijas dzīvniekiem pret vīrusiem ir uzņēmīgas baltās peles, Āfrikas seski, Sīrijas kāmji un pērtiķi.

Dzīvnieku slimību raksturo plaušu bojājumi, drudzis, un tā var izraisīt dzīvnieku nāvi. Slimības epidemioloģija. Infekcijas avots ir slims cilvēks ar klīniski izteiktu vai asimptomātisku formu. Slims cilvēks vīrusu izdala vidē klepojot, runājot, šķaudot ar siekalu, gļotu, krēpu pilieniem jau inkubācijas periodā.

Pacients kļūst lipīgs 24 stundas pirms galveno simptomu parādīšanās un rada epidēmijas briesmas 48 stundu laikā pēc to pazušanas.

Transmisijas mehānisms ir aerogēns. Pārraides ceļš ir gaisā. Cilvēka uzņēmība pret gripu ir ļoti augsta. Visas vecuma grupas slimo, galvenokārt ziemā. Bērni un vecāka gadagājuma cilvēki ir visjutīgākie. Slimības nosaukums atspoguļo epidemioloģijas iezīmes: gripa no franču valodas. satvērējs - greifers, gripa - no itāļu valodas. Influenza di freddo - aukstuma ietekme.

No visām akūtām elpceļu slimībām gripa ir masīvākā un smagākā slimība. Gripas pandēmijas un epidēmijas aptver līdz pat 30–50% vai vairāk pasaules iedzīvotāju, radot milzīgu kaitējumu valstu veselībai un ekonomikai. Pirmie gripas epidēmiju apraksti ir datēti ar 12.-14.gs. Pandēmiju un lielu epidēmiju rašanos izraisa A tipa gripas vīruss, kas ir saistīts ar vīrusa lielo mainīgumu un ir saistīts ar jauna apakštipa rašanos antigēnu nobīdes rezultātā.

Starp pandēmijām epidēmijas uzliesmojumi notiek ik pēc 1,5–2 gadiem, kas ir saistīts ar vīrusu antigēnu novirzi. 1918. gadā Spānijas gripas pandēmiju (1,5 miljardi cilvēku saslima, 20 miljoni cilvēku nomira) izraisīja A1 gripas vīruss, kas galvenokārt reģistrēts Spānijā, un tā aptvēra gandrīz visus Zemes iedzīvotājus; slimību raksturoja ārkārtīgi smagas hemorāģiskās pneimonijas attīstība ar rekordlielu mirstības līmeni (līdz 1% no visiem gadījumiem).

1957. gadā "Āzijas" pandēmiju (saslima 2 miljardi cilvēku) izraisīja jauns apakštips - A2 apakštips. 1968. gadā "Honkongas" pandēmiju (1 miljards cilvēku saslima) izraisīja jaunizveidots apakštips - A3 apakštips. Parasti jauns vīrusa variants izspiež no cilvēku populācijas agrāk cirkulējošo šķirni.

Bet 1977. gadā pēc 20 gadu pārtraukuma A1 tips negaidīti “atgriezās”, kas izraisīja lielu epidēmiju. Līdz ar to gripas vīrusa represētie varianti saglabājas un noteiktos intervālos atkal var izraisīt epidēmiju. B tipa vīruss izraisa lokālas epidēmijas, savukārt C tips neizraisa epidēmijas. Slimības patoģenēze un klīnika. Ieejas vārti ir augšējie elpceļi. Vīruss iekļūst gļotādas epitēlija šūnās un vairojas tajās.

Vīrusa ietekme uz epitēlija šūnām izraisa to nekrozi un epitēlija lobīšanos (atgrūšanu), kā rezultātā gļotāda kļūst caurlaidīga pret vīrusiem un baktērijām. Tie iekļūst asinīs un izplatās pa visu ķermeni.” Virēmiju pavada vairāki kapilāru endotēlija bojājumi ar palielinātu to caurlaidību.

Smagos gadījumos ir plaši asinsizplūdumi plaušās, miokardā, parenhīmas orgānos. Bojāto šūnu un vīrusu proteīnu sabrukšanas produkti toksiski iedarbojas uz dažādiem orgāniem un orgānu sistēmām. Vīrusa toksīni spēcīgi nomāc centrālo nervu sistēmu, un, lai gan process nav ilgs (3-5 dienas), slimais cilvēks ilgstoši paliek novājināts un novājinātajam organismam pievienojas jebkura sekundāra infekcija un rodas komplikācijas: gripas pneimonija. , akūta plaušu tūska, nieru bojājumi , sirds, bronhi.

Bieža gripas komplikācija ir bakteriāla pneimonija (B grupas streptokoki). Spānijas gripas pandēmijas laikā cilvēki nomira galvenokārt no sekundāras bakteriālas pneimonijas.

Gripas patoģenēzē svarīga ir ne tikai intoksikācija, bet arī alergizācija, kā arī imūnkompetentu šūnu funkcionālo īpašību pārkāpums, attīstoties imūndeficītam. Inkubācijas periods ir vairākas stundas - 1-3 dienas. Raksturīgs ar akūtu sākumu, drudzis līdz 37,5-38 ° C, vispārēja intoksikācija, kas izpaužas kā savārgums, galvassāpes, sāpes acs ābolos, dažāda smaguma elpceļu iekaisuma procesi (rinīts, laringīts, traheīts, faringīts).

Drudžains stāvoklis ar gripu bez komplikācijām ilgst 5-6 dienas. Imunitāte. Pēc saslimšanas veidojas tipa un celmam specifiska imunitāte, ko nodrošina specifiski un nespecifiski šūnu un humorālie faktori. Liela nozīme ir Ig A antivielām.Krusta imunitāte neveidojas, pārslimot ar A1 tipa gripu var saslimt ar A2 tipa gripu u.c. Pēc imunitātes tipa vīrusa - 1-2 gadi, pēc B tipa vīrusa - 3-5 gadi.

Pasīvā dabiskā imunitāte - bērniem līdz 8 - 11 mēnešiem. Sakarā ar vīrusa lielo antigēnu mainīgumu, atveseļošanās neizraisa noturīgas imunitātes veidošanos pret atkārtotu inficēšanos.

Laboratorijas diagnostika. Pētāmais materiāls: uztriepes-nospiedumi no deguna gļotādas, nazofaringeālie izdalījumi, plaušu gabali, smadzenes nāvējošu iznākumu gadījumā.

Diagnostikas metodes: 1) citorinoskopijas metode - vīrusam raksturīgu intracelulāru ieslēgumu noteikšana - mikroskopā krāsojot ar pioktanīnu, ciliārā epitēlija šūnās ir redzami spilgti sarkani gripas vīrusa ieslēgumi; 2) virusoloģiskā metode - gripas vīrusa izdalīšana no cilvēka organisma, inficējot cāļu embrijus ar skalojamo līdzekli no pacienta nazofarneksa; vīrusa indikācija (klātbūtne) tiek veikta, izmantojot RGA (gripas vīrusi aglutinē cilvēku un dažādu dzīvnieku eritrocītus), vīrusa identificēšana tiek veikta posmos: RSC nosaka veidu, hemaglutinīna apakštipu nosaka RTGA un neiraminidāzes apakštips tiek noteikts enzīmu aktivitātes inhibēšanas reakcijā; 3) seroloģiskā metode - specifisko antivielu titra palielinājuma (4 reizes) noteikšana pacienta asins serumā, izmantojot RSK, RTGA, PH šūnu kultūrā, gēla izgulsnēšanās reakcija, ELISA; 4) bioloģiskā metode - peļu intranazāla infekcija - materiāla ievadīšana plaušās ētera anestēzijā; peles mirst pēc 2 - 3 dienām pneimonijas rezultātā; 5) ekspresdiagnostika - vīrusa antigēna noteikšana, izmantojot RIF.

Ārstēšana un profilakse.

Profilaksei un ārstēšanai slimības pirmajās dienās lieto cilvēka leikocītu interferonu (intranazāli). Terapeitiskos nolūkos izmanto pretvīrusu zāles - rimantadīnu (A tipa gripa), adapromīnu, virazolu un imūnmodulējošus medikamentus - dibazolu, prodigiozānu, levomizolu.

Smagas gripas gadījumā, īpaši bērniem, tiek lietots donoru pretgripas imūnglobulīns, kā arī zāles - šūnu proteāžu inhibitori (gordokss, kontrikāls, aminokaproīnskābe).

Īpaša profilakse. Tiek izmantoti šādi pretvīrusu medikamenti un imūnmodulatori, kā arī dzīvās un inaktivētās vakcīnas: 1) dzīvās monovakcīnas perorālai ievadīšanai - pašlaik cirkulējošo vīrusu novājinātie celmi (A1, A3 un B); uzrāda vislielāko imunogenitāti; 2) visa viriona vakcīnas no virulentiem celmiem, kas inaktivēti ar formaldehīda vai UV stariem; 3) apakšvienības gripas vakcīnas tikai no virsmas antigēniem - HA un NA antigēniem (ir minimāla reaktogenitāte).

Lai iegūtu vakcīnas, vīrusus kultivē cāļu embrijos un cāļu embriju šūnu kultūrā.

Ar vakcīnu ieviešanu veidojas lokāla un humorāla imunitāte. Vakcinācija tiek veikta laikā, kad ir vislielākais epidēmiju attīstības risks. Tas ir vairāk piemērots jauniem un veciem cilvēkiem. Nogalināto vakcīnu lietošanai nepieciešama ikgadēja revakcinācija; to efektivitāte nepārsniedz 60-70%.

Jo Tā kā bieži tiek novērotas patogēna antigēnas variācijas, attiecīgā vīrusa antigēnu komplektu imunizācijai var noteikt tikai pēc slimības uzliesmojuma sākuma.

Biļete 15.

Hemaglutinācijas reakcija (RGA).

Laboratorijā tiek izmantotas divas dažādas hemaglutinācijas reakcijas.

Pirmais RGA attiecas uz seroloģisko. Šajā reakcijā eritrocīti tiek aglutinēti, mijiedarbojoties ar attiecīgajām antivielām (hemaglutinīniem).

Reakciju plaši izmanto asins grupu noteikšanai.

Otrais RHA nav seroloģisks. Tajā eritrocītu aglutinācija netiek izraisīta

antivielas, bet īpašas vielas, ko veido vīrusi. Piemēram, gripas vīruss aglutinē vistu un jūrascūciņu eritrocītus, poliomielīta vīruss – aitu eritrocītus. Šī reakcija ļauj spriest par konkrēta vīrusa klātbūtni testa materiālā.

Reakciju veic mēģenēs vai uz īpašām plāksnēm ar iedobēm.

Materiālu, kas jāpārbauda vīrusa klātbūtnei, atšķaida ar izotonisku šķīdumu no 1:10 līdz 1:1280; 0,5 ml katra atšķaidījuma sajauc ar vienādu tilpumu 1-2% eritrocītu suspensijas. Kontrolē 0,5 ml eritrocītu sajauc ar 0,5 ml izotoniskā šķīduma. Mēģenes ievieto termostatā uz 30 minūtēm, un plāksnes atstāj istabas temperatūrā 45 minūtes.

Rezultātu uzskaite. Ar pozitīvu reakcijas rezultātu mēģenes vai iedobes apakšā nokrīt eritrocītu nogulsnes ar šķembām malām ("lietussargs"), kas aptver visu iedobes dibenu.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija

Ja rezultāts ir negatīvs, eritrocīti veido blīvas nogulsnes ar gludām malām (“poga”). Tās pašas nogulsnes jākontrolē.

Reakcijas intensitāti izsaka ar "+" zīmēm. Vīrusa titrs ir materiāla maksimālais atšķaidījums, kurā notiek aglutinācija.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija

Šī ir seroloģiska reakcija, kurā specifiskas pretvīrusu antivielas, mijiedarbojoties ar vīrusu (antigēnu), neitralizē to un atņem spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas, t.i.

e. inhibē hemaglutinācijas reakciju. Šī reakcija ļauj noteikt vīrusu veidu un veidu.

Reakcijas iestatījums. 0,25 ml pretvīrusu seruma sajauc ar vienādu daudzumu materiāla, kas satur vīrusu. Maisījumu sakrata un ievieto termostatā uz 30 minūtēm, pēc tam pievieno 0,5 ml 1-2% eritrocītu suspensijas.

Rezultātu uzskaite. Pareizi iestatot eksperimentu seruma un eritrocītu kontrolē, jāveidojas "pogai" - nav eritrocītus aglutinējoša faktora; antigēnu kontrolē veidojas "lietussargs" - vīruss izraisīja eritrocītu aglutināciju.

Ja serums ir homologs pētāmajam vīrusam, veidojas "poga" – serums vīrusu ir neitralizējis.

Netiešā hemaglutinācijas reakcija

Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas (RIHA) reakcija balstās uz to, ka eritrocīti, ja uz to virsmas adsorbējas šķīstošs antigēns, mijiedarbojoties ar antivielām pret adsorbēto antigēnu, iegūst aglutinācijas spēju.

Reakcijas iestatījums.

Serumu karsē 30 minūtes 56 °C temperatūrā, secīgi atšķaida proporcijā 1:10 - 1:1280 un ielej mēģenēs vai iedobēs pa 0,25 ml, kur pēc tam pievieno 2 pilienus eritrocītu ar uz tiem adsorbētiem antigēniem.

Vadības ierīces: eritrocītu suspensija ar uz tiem adsorbētiem antigēniem ar acīmredzami imūnserumu, eritrocītu suspensija ar uz tiem adsorbētiem antigēniem ar normālu serumu; normālu eritrocītu suspensija ar pārbaudīto serumu.

Pirmajā kontrolē vajadzētu notikt aglutinācijai, otrajā un trešajā tā nedrīkst būt.

Testa jautājumi.

1. Par ko liecina pozitīvs RGA rezultāts starp eritrocītiem un materiālu, kas pārbaudīts uz vīrusa klātbūtni?

2. Vai, ja tiem pievienos vīrusu un tam atbilstošu serumu, notiks eritrocītu aglutinācijas reakcija?

Kā sauc reakciju, kas atklāj šo parādību?

PRAKTISKAIS DARBS №12.

Komplementa saistīšanās reakcija.

Komplementa saistīšanās reakcija (RCT) ir balstīta uz faktu, ka specifisks antigēna-antivielu komplekss vienmēr adsorbē (saista) komplementu uz sevi.

Šo reakciju plaši izmanto antigēnu identificēšanā un infekciju, īpaši spirohetu (Wassermann reakcija), riketsiju un vīrusu izraisītu slimību, serodiagnozē.

PCS ir sarežģīta seroloģiska reakcija.

Tas ietver komplementu un divas antigēnu-antivielu sistēmas. Būtībā tās ir divas seroloģiskas reakcijas.

Labā pamata sistēma sastāv no antigēna un antivielas (viena zināma, otra ne). Tam tiek pievienots zināms daudzums komplementa. Ja šīs sistēmas antigēns un antiviela sakrīt, tie savienos un izveidos komplimentu. Iegūtais komplekss ir smalki izkliedēts un nav redzams.

Šī kompleksa veidošanās ir zināma ar otrās hemolītiskās jeb indikatoru sistēmas palīdzību.

Tajā ietilpst aitu eritrocīti (antigēns) un tiem atbilstošais hemolītiskais serums (antiviela), t.i. gatavs imūnkomplekss. Šajā sistēmā eritrocītu līze var notikt tikai komplementa klātbūtnē. Ja komplements ir saistīts ar pirmo sistēmu, tad otrajā sistēmā hemolīzes nebūs;

nav bezmaksas papildinājuma. Hemolīzes neesamība (mēģenes saturs ir duļķains vai mēģenes apakšā ir eritrocītu nogulsnes) tiek reģistrēts kā pozitīvs RSK rezultāts.

Ja pirmajā sistēmā antigēns neatbilst antivielai, tad imūnkomplekss neveidojas un kompliments paliks bez maksas. Paliekot brīvam, kompliments piedalās otrajā sistēmā, izraisot hemolīzi, RSK rezultāts ir negatīvs (caurules saturs ir caurspīdīgs - "lakas asinis").

Sastāvdaļas, komplementa fiksācijas reakcijas:

Antigēns - parasti lizāts, ekstrakts, haptēns,

retāk mikroorganismu suspensija.

2. Antiviela – pacienta serums.

3. Komplements - jūrascūciņas serums.

Antigēns – aitas eritrocīti.

5. Antiviela - hemolizīns pret aitu eritrocītiem.

6. Izotoniskais šķīdums.

Sakarā ar to, ka RSC ietver lielu skaitu sarežģītu komponentu,

tie ir iepriekš jātitrē un jāieņem reakcijā precīzos daudzumos un vienādos tilpumos: 0,5 vai 0,25 ml, retāk 0,2, 1,25 vai 1,0 ml (lielāks tilpums dod precīzāku rezultātu). Reakcijas komponentu titrēšana tiek veikta tādā pašā tilpumā kā eksperiments, aizstājot trūkstošās sastāvdaļas ar izotonisku šķīdumu.

Saistītā informācija:

Vietnes meklēšana:

Tas ir balstīts uz faktu, ka eritrocīti, uz kuriem ir iepriekš adsorbēti antigēni, iegūst spēju aglutinēties homologu serumu (antivielu) klātbūtnē.

Šajā gadījumā eritrocīti spēlē nesēju lomu ar specifiskiem determinantiem, kuru aglutinācija notiek antigēna + antivielu reakcijas rezultātā.

Eritrocītus, kuru virsmai ir stingri piestiprināti antigēni, sauc par eritrocītu antigēnu diagnostiku jeb eritrocītiem, kas sensibilizēti ar antigēnu.

Cits RNHA veids - antivielas tiek adsorbētas uz eritrocītu virsmas un to sekojošā aglutinācija notiek homologa antigēna klātbūtnē.

Šajā gadījumā šādus eritrocītus sauc par eritrocītu antivielu diagnostiku jeb eritrocītiem, kas sensibilizēti ar antivielām.

Pamatojoties uz šīm divām fundamentālajām metodoloģiskajām pieejām, ir izstrādātas un tiek izmantotas daudzas RNGA modifikācijas. Tātad mazas standarta lateksa daļiņas tiek izmantotas kā nesēji.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HITA)

Šajā gadījumā reakciju sauc par lateksa aglutinācijas reakciju (RLA) jeb izmanto Staphylococcus aureus - koagulācijas reakciju utt. Parasti eritrocītu diagnostikas tiek gatavotas bioloģiskās rūpniecības uzņēmumos, un galvenā RNGA pieredze jau tiek noteikta diagnostikas laboratorijās.

Eritrocītu diagnostikas sagatavošana ietver šādas darbības:

eritrocītu fiksācija ar formaldehīdu vai glutārā vai akrila aldehīdiem.
Šādi apstrādāti eritrocīti tiek uzglabāti ilgu laiku. Biežāk šim nolūkam tiek izmantoti aitu, cilvēku, vistu u.c. eritrocīti;
fiksētu eritrocītu apstrāde ar tanīna šķīdumu. Rezultātā eritrocīti iegūst īpašību neatgriezeniski adsorbēt olbaltumvielas (vīrusus un antivielas) uz to virsmas;
tanizētu eritrocītu sensibilizācija ar vīrusiem vai antivielām.

Jāpiebilst, ka vīrusu infekciju eritrocītu diagnostikas sagatavošanas metodes ir dažādas.

RNHA iestatīšanas paņēmiens antivielu titra noteikšanai un noteikšanai ir šāds:

secīgiem 2-kārtīgiem seruma atšķaidījumiem pievieno vienādas devas ar antigēnu sensibilizētu eritrocītu;
maisījumu atstāj 2-3 stundas istabas temperatūrā vai 16-18 stundas 4 °C temperatūrā;
ņemt vērā rezultātus.
Ja serumā ir antivielas pret vīrusu, ar kuru tika sensibilizēti eritrocīti, tiek novērota hemaglutinācija, ko novērtē krustojumos.

Seruma antivielu titru uzskata par augstāko seruma atšķaidījumu, kas joprojām nodrošina hemaglutināciju ar vismaz diviem krustojumiem.

RNGA ir pievienotas visas atbilstošās vadīklas. Parasti viņi reakciju veic ar mikrometodi.

RNHA ļauj atrisināt šādus diagnostikas uzdevumus:

nosaka antivielas un nosaka to titru asins serumā, izmantojot zināmu eritrocītu antigēnu diagnostiku;
atklāt un identificēt nezināmu vīrusu, izmantojot zināmu eritrocītu antivielu diagnostiku.

RNGA priekšrocības: augsta jutība, viegla iestatīšanas tehnika un ātra reakcija.

Tomēr ir svarīgi atzīmēt, ka pastāv lielas grūtības stabilu eritrocītu diagnostikas sagatavošanā (liela atkarība no izmantoto komponentu tīrības, nepieciešamība izvēlēties eritrocītu fiksācijas, tanizācijas un sensibilizācijas veidu katram vīrusa veidam) .

Ja atrodat kļūdu, lūdzu, atlasiet teksta daļu un nospiediet Ctrl+Enter.

Saskarsmē ar

Klasesbiedriem

Tajā izmanto eritrocītus vai neitrālus sintētiskus materiālus (piemēram, lateksa daļiņas), uz kuru virsmas adsorbējas antigēni (baktēriju, vīrusu, audu) vai antivielas.

To aglutinācija notiek, kad tiek pievienoti atbilstoši serumi vai antigēni. Ar antigēniem sensibilizētos eritrocītus sauc par antigēnu eritrocītu diagnostiku, un tos izmanto antivielu noteikšanai un titrēšanai. Eritrocīti, kas sensibilizēti ar antivielām. sauc par imūnglobulīna eritrocītu diagnostiku un izmanto antigēnu noteikšanai.

Pasīvās hemaglutinācijas reakcija tiek izmantota, lai diagnosticētu slimības, ko izraisa baktērijas (tīfs un paratīfs, dizentērija, bruceloze, mēris, holēra u.c.), vienšūņi (malārija) un vīrusi (gripa, adenovīrusu infekcijas, vīrusu hepatīts B, masalas, ērču pārnēsātie līdzekļi). encefalītu, Krimas hemorāģisko drudzi u.c.), kā arī noteiktu noteiktu hormonu līmeni, lai noteiktu pacienta paaugstinātu jutību pret zālēm un hormoniem, piemēram, penicilīnu un insulīnu.

Pasīvās hemaglutinācijas (RPHA) reakcija.

Pasīvās hemaglutinācijas tests ir jutīga seroloģiskās diagnostikas metode un tiek izmantota gan agrīnai, gan retrospektīvai diagnostikai, kā arī vakcinēto cilvēku imunoloģiskā stāvokļa noteikšanai. Pacientiem ar tularēmiju antivielas parasti tiek konstatētas slimības 1. vai 2. nedēļas beigās, pēc 1-1,5 mēnešiem TPHA titri sasniedz maksimālās vērtības (1:100 000-1:20 000, retāk augstāks), pēc tam tie samazinās līmenī 1:100-1:200 saglabājas ilgu laiku.

Arī vakcinētajiem antivielas tiek konstatētas pastāvīgi, tomēr zemākos titros, kas nepārsniedz 1:2000-1:5000 1-1,5 mēnešus pēc vakcinācijas, vairākus gadus saglabājas zemā līmenī 1:20-1:80.

Eritrocītu diagnostikas tularēmija (antigēna) kalpo kā antigēns RPHA noteikšanai.

Zāles ir formalinizēti ar tularēmijas antigēnu sensibilizēti aunu eritrocīti, kas pieejami šķidrā un sausā veidā. Šķidrais preparāts - 10% eritrocītu suspensija formalīna šķīdumā ar 10% koncentrāciju. Sauss liofilizēts preparāts - vakuumā kaltēta 10% eritrocītu suspensija bez konservantiem. Pirms lietošanas to atšķaida saskaņā ar norādījumiem uz etiķetes. Reakcijas iestatīšanai polistirola plāksnēs abus preparātus izmanto 2,5% koncentrācijā un, veidojot reakciju mikrotilpumos, 0,5% koncentrācijā.

RPGA iestatīšanas tehnika.

Testa serumus atšķaida ar fizioloģisko šķīdumu attiecībā 1:5 (1:10) un 30 minūtes karsē 56 °C temperatūrā.

Hemaglutinācijas reakcija (RHA) un

Pēc tam, lai atdalītu heterogēnās antivielas pret aunu eritrocītiem, serumus apstrādā ar 50% formalizētu aunu eritrocītu suspensiju. Lai to izdarītu, eritrocītus pievieno ar ātrumu 2 pilieni (0,05 ml) uz 1 ml seruma un rūpīgi samaisa, kratot.

Serumu atstāj līdz pilnīgai eritrocītu sedimentācijai vai centrifugē pēc vienas stundas istabas temperatūrā, pēc tam tas ir gatavs izpētei.

Atšķaidīšanas šķidrumu 0,5 ml tilpumā ielej vairākās polistirola plāksnes iedobēs.

Sākotnējā serumu izpētē ir ieteicams tos pārbaudīt, iestatot reakciju īsā plāksnes rindā (6 caurumi). Ja antivielas tiek noteiktas īsā serumu sērijā, serumi tiek atkārtoti pārbaudīti ilgā atšķaidījumu sērijā (12 iedobes).

Pēc atšķaidīšanas šķidruma izliešanas katras rindas pirmajai iedobei (īsai vai garai) pievieno 0,5 ml testa seruma 1:5 atšķaidījumā. Pēc tam tādos pašos apjomos serumu titrē ar divkāršiem atšķaidījumiem. Tādējādi seruma atšķaidījumus iegūst īsā sērijā no 1:10 līdz 1:320, bet garā sērijā - no 1:10 līdz 1:20480. Pēc serumu titrēšanas katrā iedobē pievieno vienu pilienu (0,05 ml) sensibilizētu eritrocītu 2,5% darba suspensijas.

Plākšņu saturu rūpīgi sakrata, līdz iegūst viendabīgu suspensiju. Plāksnes atstāj istabas temperatūrā uz stacionāras galda virsmas. Reakcijas iepriekšēju reģistrāciju veic pēc 2-3 stundām, galīgo titra noteikšanu veic pēc pilnīgas eritrocītu sedimentācijas iedobēs. Reakcijai ir paredzētas šādas kontroles: 1) testa serums atšķaidījumā 1:10 0,5 ml tilpumā + 1 piliens 2,5% nesensibilizētu eritrocītu suspensijas; 2) atšķaidīšanas šķidrums 0,5 ml tilpumā + 1 piliens 2,5% nesensibilizētu eritrocītu suspensijas; 3) atšķaidīšanas šķidrums 0,5 ml tilpumā + 1 piliens 2,5% sensibilizētu eritrocītu suspensijas.

Visām kontrolēm jāsniedz nepārprotami negatīva reakcija.

RPGA uzskaite un novērtēšana. Reakciju novērtē pēc šādas shēmas:

1) krasi pozitīva reakcija (++++) - eritrocīti viendabīgā slānī nokrīt akas dibenā "lietussarga" veidā, kam bieži ir šķembas malas;

2) pozitīva reakcija (+++) - eritrocīti nosedz vismaz 2/3 no bedres dibena;

3) vāji pozitīva reakcija (++) - aglutināts ir mazs un atrodas pašā bedres centrā;

4) apšaubāma reakcija (+) - ap eritrocītu nogulsnēm pašā bedres centrā ir atsevišķi aglutināta graudi;

5) negatīvs (-) - urbuma apakšā eritrocīti nosēžas "pogas" vai neliela gredzena veidā ar gludām, asi izteiktām malām.

Seruma titru ņem vērā pēc pēdējā seruma atšķaidījuma, kas deva ļoti skaidru reakciju (vismaz trīs plusi).

Atšķaidījums 1:100 un vairāk tiek uzskatīts par diagnostikas titru, tomēr, tāpat kā RA gadījumā, ir jāuzrauga tā palielināšanās.

TPHA tularēmijas gadījumā ir diezgan specifiska un nosaka dažas krusteniskas reakcijas tikai ar brucelozes serumiem. Diferenciāldiagnoze ir iespējama pēc TPHA titru augstuma, kas ir daudz augstāki ar homologu antigēnu.

RPHA iestatīšanas tehnika mikroapjomos.

RPHA var veikt mikroapjomos, izmantojot Takachi tipa mikrotitru (vai apaļas dibena mikrotitrēšanas plates ar mikropipetēm), kas ļauj titrēt materiālu 25 µl un 50 µl tilpumos. Reakciju iestatīšanas tehnika, visu darbību secība ir tāda pati kā pētījumā polistirola plāksnēs. Tomēr jāpatur prātā, ka mikrometodes jutīgums parasti ir katram atšķaidījumam (t.

2 reizes) zemāks par makrometodi.

Lai iestatītu reakciju mikrotitrā, izmantojot pipetes pilinātāju, katrā iedobē ievada atšķaidīšanas šķidrumu 50 µl tilpumā. Pēc tam, izmantojot titrētājus ar 50 μl galviņu, ņem testa serumu, iegremdējot tajā galvu.

Pārliecinieties, vai šķidrums ir piepildījis titratora galviņu. Titrators ar serumu tiek pārnests uz pirmo iedobi un, turot to vertikālā stāvoklī, veic vairākas rotācijas kustības abos virzienos. Pēc tam titratoru pārnes uz nākamo iedobi un manipulāciju atkārto. Titrēšanu var veikt vienlaikus vairākās rindās. Pēc visas rindas titrēšanas titrētāju ar rotācijas kustībām mazgā ar destilētu ūdeni (mainot 2 porcijas), ūdeni no galvas noņem ar tamponu un sadedzina uz degļa liesmas.

Pēc titrēšanas iedobēm pievieno 25 μl eritrocītu diagnostikas.

Diagnostikas RPHA koncentrācijai mikrotilpumos jābūt 0,5% (t.i., 2,5% eritrocītu suspensiju papildus atšķaida 5 reizes). Pēc eritrocītu pievienošanas plāksnes viegli jāsakrata, līdz tiek iegūta viendabīga suspensija. Rezultātus var reģistrēt jau pēc 1-1,5 stundām, kas ir būtiska RPHA priekšrocība mikrotitrā.

Turklāt šai metodei ir nepieciešams neliels daudzums visu reakcijas sastāvdaļu un testa serumu.

Reakcija tiek uzskaitīta šādi:

1) "+" - pilnīga hemaglutinācija, kurā eritrocīti viendabīgā slānī nokrīt akas dibenā "lietussarga" veidā, aizņemot vismaz 2/3 no dibena;

2) "+ -" - daļēja hemaglutinācija, kurā eritrocīti nokrīt uz leju maza izmēra vaļīga gredzena veidā;

3) "-" - hemaglutinācijas neesamība, kad eritrocīti nokrīt apakšā nelielas pogas vai gredzena veidā ar gludu malu.

TPHA iegūtā pozitīvā rezultāta specifiku var pārbaudīt, izmantojot trīskomponentu reakciju - pasīvās hemaglutinācijas (RPHA) inhibēšanas reakciju.

RTPGA iestatīšanas tehnika.

Šī reakcija ir iestatīta, lai apstiprinātu RPHA pozitīva rezultāta specifiku, ja tas ir apšaubāms vai īpaši epidemioloģiski interesants. Reakcijas mehānisms ir specifiska hemaglutinācijas inhibīcija, kad testa serumam tiek pievienota nogalinātu tularēmijas baktēriju suspensija. Reakcijā mijiedarbojas trīs komponenti: testa serums, specifiskais tularēmijas antigēns un antigēnais eritrocītu diagnostiskais RTPGA parasti tiek ievietoti 7-8 iedobju rindā.

Ir ieteicams uzstādīt otru RPGA paralēli RTPGA. Divās iedobju rindās ielej 0,25 ml atšķaidīšanas šķidruma, pēc tam abu rindu pirmajās iedobēs pievieno testa serumu 0,25 ml tilpumā un titrē.Iegūst divas identiskas seruma atšķaidījumu rindas. Pievienojiet 0,25 ml atšķaidīšanas šķidruma visās otrās rindas iedobēs un 0,25 ml tularēmijas baktēriju suspensijas pirmās rindas iedobēs.

Tiek izmantots tularemia diagnosticum (satur 25 miljardus tularēmijas baktēriju uz 1 ml), iepriekš atšķaidīts 50 reizes.

Šāda suspensija satur 500 miljonus baktēriju 1 ml vai 125 miljonus 0,25 ml tilpumā. Pēc antigēna pievienošanas plāksni atstāj uz 1 stundu istabas temperatūrā, pēc tam uz visām abu rindu iedobēm pievieno vienu pilienu (0,05 ml) eritrocītu diagnostikas, plāksni sakrata un atstāj uz līdzenas galda virsmas.

Grāmatvedība tiek veikta 2-3 stundu laikā.

RTPGA uzskaite un novērtēšana. Ja testa serums satur specifiskas tularēmijas antivielas, tās neitralizē pievienotais antigēns, un pirmajā iedobju rindā nenotiks hemaglutinācija vai arī ar augstu seruma titru hemaglutinācija tiks novērota mazākās (2-4) iedobēs nekā iedobēs. rinda ar TPHA. Šajā gadījumā tiek apstiprināta rezultātu specifika.

Ja abās rindās ir atzīmēta hemaglutinācija, t.i. RTHA un RPHA rezultāti sakrīt, tas norāda uz tularēmijas antivielu neesamību testa serumā. Šajā gadījumā primārais RPHA rezultāts tiek uzskatīts par nespecifisku.

RTPGA iestatīšanas paņēmiens mikroapjomos. RTHA, kā arī RPHA var veikt mikroapjomos, izmantojot Takachi tipa mikrotitru.

Lai to izdarītu, mikroplāksnīšu iedobēs divās rindās pa 7-8 iedobēm pievieno 0,25 μl atšķaidīšanas šķidruma. Pēc tam ar titratora palīdzību abās rindās novērtē un titrē 0,25 μl testa seruma. Pēc tam katrai iedobei pirmajā rindā pievieno 25 μl tularēmijas antigēna (kura koncentrācija ir 500 miljoni tularēmijas baktēriju 1 ml), bet otrajā rindā 25 μl atšķaidīšanas šķidruma.

Plāksnes atstāj uz 1 stundu istabas temperatūrā, pēc tam visām abu rindu iedobēm pievieno 25 μl antigēna eritrocītu diagnostikas (0,5% koncentrācija).

Rezultātu uzskaite un novērtēšana tiek veikta līdzīgi kā reakcija makroapjomos.

Publicēšanas datums: 2015-02-03; Lasīts: 3176 | Lapas autortiesību pārkāpums

studopedia.org — Studopedia.Org — 2014-2018. (0,003 s) ...

Labi veikta asins analīze palīdz atklāt dažādu sarežģītu slimību ierosinātājus organismā to attīstības sākumposmā un dažkārt pat pirms slimības klīnisko simptomu parādīšanās. Ļoti bieži ārsti izraksta pacientiem aglutinācijas reakcijas analīzi. Tālāk mēs aplūkosim to, ka šī ir RPHA asins analīze, kad to lieto un par ko tas var pastāstīt?

Darbības princips

Netiešā hemaglutinācijas reakcija (saukta arī par pasīvo hemaglutinācijas reakciju, kas pazīstama arī kā RPHA, RNHA) rodas, kad eritrocīti, kas adsorbē antigēnu, tiek pakļauti šim antigēnam atbilstošajam imūnserumam.

Pētījumi liecina, ka šī metode ir ievērojami pārāka par citiem seroloģiskajiem testiem specifiskuma un jutīguma ziņā. Tāpēc to bieži izmanto baktēriju vai riketsiju izraisītu slimību noteikšanai. Par antigēniem šādai analīzei var kalpot baktēriju ekstrakti, dažādu mikrobu attīrīti antigēni, baktēriju vakcīnu sastāvdaļas.

Pēc patogēnas baktērijas iekļūšanas cilvēka ķermenī tajā sāk ražot specifiskas un nespecifiskas antivielas, veidojot noteiktu imūnreakciju. Sifilisa gadījumā, ko, domājams, izraisa treponema pallidum, cilvēka asinīs veidojas gramnegatīva spiroheta, netreponēmas vai treponēmas antivielas. Laboratorijas diagnostikas pētījumi ir balstīti uz to noteikšanu, kam vajadzētu apstiprināt vai atspēkot vīrusa izraisītāja klātbūtni organismā.

Ar RPHA eritrocīti, kuru virsma adsorbēja bālās treponēmas antigēnus, ja tiek pievienots serums ar antivielām pret treponēmu no cilvēka, kas inficēts ar sifilisu, saķeras, tas ir, notiek to aglutinācija.

Pētījuma ticamība

Ir svarīgi atcerēties, ka antivielas pret pallidum spirohetu inficēto cilvēku organismā sāk parādīties 2-4 nedēļas pēc inficēšanās, un dažos gadījumos šo periodu var pagarināt līdz 6 nedēļām.

Šī iemesla dēļ RPHA analīzes jutīgums slimības primārajā attīstības stadijā ir aptuveni 86%, kas ir ievērojami zemāks par pacientu diagnosticēšanas precizitāti nākamajos divos posmos. Analīzes jutīgums šādiem pacientiem, kā arī latenta sifilisa nesējiem sasniedz 99-100%.

Tomēr pasīvās hemaglutinācijas reakcijai ir ļoti augsta specifika, kas sasniedz 96-100%.

Tas ļauj izmantot šo izmeklējumu, lai apstiprinātu diagnozi, ja ir pozitīva provizoriskā netreponēmiskā pētījuma reakcija, piemēram, urīnpūšļa vēža mikronogulsnēšanās reakcija.

Ņemot vērā, ka treponēmālo testu, tostarp TPHA, jutīgums ievērojami pārsniedz netreponēmālo metožu jutīgumu, šādi testi arvien biežāk tiek noteikti sifilisa skrīninga pārbaudēm. Tomēr, ja tiek iegūta pozitīva skrīninga reakcija, diagnozes precizēšanai ir nepieciešama cita specifiska (treponēma) analīze, bet ne TPHA.

Analīzes atšifrēšana

Ja reaģentam, ar kuru tiek veikts pētījums, tiek pievienots serums ar antivielām pret treponēmu no sifilisa inficētas personas materiāla, notiek eritrocītu aglutinācija, kā rezultātā tie izgulsnējas.

Pielipušo eritrocītu skaitu ietekmē antivielu līmenis serumā. Tāpēc pasīvā hemaglutinācija ne tikai parāda antivielu klātbūtni, bet arī ļauj iestatīt to skaitu. Pētījuma rezultātu attēlo antivielu titra līmenis.

Pozitīva reakcija norāda uz patogēna klātbūtni pacienta organismā. Taču diagnostikas procesā var rasties viltus pozitīvas reakcijas, kuru skaits statistiski nepārsniedz 0,05-2,5% no kopējā pētījumu skaita.

Pozitīva TPHA reakcija cilvēkiem, kuri nav inficēti ar sifilisu, var rasties, ja ir:

sistēmiskas saistaudu slimības,
pacienta asinīs ir antivielas pret patogēniem, kas līdzīgi bālai treponēmai,
fizioloģiskas patoloģijas, piemēram, miokarda infarkts,
B vai C hepatīts
onkoloģiskās slimības,
vēdertīfs, leptospiroze, tuberkuloze,
HIV infekcija
ērču pārnēsātās boreliozes etioloģija,
plaši ievainojumi vai lūzumi,
grūtniecība,
zāļu injekciju gadījumā.

Vairumā gadījumu viltus pozitīvas reakcijas pavada zems titrs. Augsti titri ir raksturīgi slimības sekundārajai stadijai un iepriekš latentam sifilisam. Tomēr tie var parādīties arī ar viltus pozitīvu reakciju pacientiem ar ļaundabīgiem audzējiem.

Cilvēkiem, kuriem vismaz vienu reizi ir bijis sifiliss, RPHA reakcija saglabājas pozitīva līdz viņu dzīves beigām.

Reti izņēmumi ir tās situācijas, kad slimība tika atklāta agrīnā attīstības stadijā, pēc kuras tika veikta intensīva un efektīva terapija. Tāpēc TPHA analīzi nevar izmantot, lai novērtētu atveseļošanās dinamiku vai salīdzinošu diagnozi slimības agrīnās vai vēlīnās stadijās.

Saņemot pozitīvu reakciju, nepieciešams pārbaudīt slimā cilvēka ģimenes locekļus un personas, kurām ar viņu bijis seksuāls kontakts.

Negatīvu reakciju var iegūt šādos gadījumos:

personai nav sifilisa,
nepareizi paņemtas asinis pētniecībai,
Kopš inficēšanās ir pagājušas 2-4 nedēļas, un antivielu ražošana vēl nav sākusies.

Jebkurā gadījumā pētījuma rezultāts ir jānovērtē kopā ar papildu laboratorijas un anamnēzes rādītājiem.

Kam tiek parādīta analīze?

Ārsts var novirzīt asins ziedošanu RPHA pacientiem šādos gadījumos:

sifilisa klīnisko izpausmju klātbūtnē: čūlaini izsitumi, palielināti limfmezgli, difūza alopēcija un citi,
ja Jums ir aizdomas par iespējamu infekciju, saskaroties ar jau slimiem cilvēkiem,
donori, kuri vēlas ziedot asinis,
personas, kuras veic ikgadējas profilaktiskās apskates vai sastāda sanitārās grāmatiņas,
pacienti ar pozitīvu skrīninga testu,
pirms uzņemšanas slimnīcā,
pirmsoperācijas pārbaudes laikā
salmonelozes, difterijas, dizentērijas patogēnu noteikšanai ar RPHA veikšanas metodi ar atbilstošu diagnostiku.

Pētījuma procedūra

Pacienta iesniegtais venozo asiņu paraugs tiek nosūtīts pārbaudei. Lai nesaņemtu kļūdainu secinājumu, pacientam ir jābūt atbildīgam par sagatavošanos analīzei. Lai testa rezultāti būtu ticami, jāievēro šādi ieteikumi:

Analīze jāveic tikai tukšā dūšā.
Analīzes dienā minimālos daudzumos varat dzert minerālūdeni bez gāzes.
Pirms testa nevajadzētu smēķēt vismaz 30 minūtes, bet labāk šo laiku palielināt līdz vairākām stundām.
Tiek noteikts tiešs alkoholisko dzērienu lietošanas aizliegums.
Pacientiem, kuriem regulāri jālieto kādas zāles, noteikti par to jāinformē ārstējošais ārsts.
Ja jūtaties slikti vai jūtaties slikti, jums par to jāpaziņo medmāsai, kas ņem asins paraugu, vai ārstam poliklīnikā, kurā jums jāveic pārbaude.

Esiet atbildīgs ne tikai par jautājumu, kur kārtot testu, bet arī par sagatavošanos eksāmenam.

Citu infekcijas slimību diagnostika

Nevajadzētu domāt, ka šādu pētījumu kā RPGA var veikt tikai, lai identificētu sifilisa izraisītāju organismā.

Analīze ar salmonellas diagnostiku ļauj noteikt infekcijas klātbūtni gremošanas sistēmā - salmonellu. Sākot ar ceturto dienu pēc inficēšanās, organisms ražo antivielas pret salmonellas antigēniem, kuras var noteikt ar RPGA metodi. Negatīvs rezultāts norāda uz infekcijas neesamību, un pozitīvs titrs, kas akūtā fāzē palielinās no 1:200 līdz 1:800, norāda uz tā klātbūtni.

RPHA veikšanas metode ar difterijas marķieri ļauj diagnosticēt difteriju un novērtēt imunitāti pēc vakcinācijas. Imūnsistēma sāk ražot antivielas jau nākamajā dienā pēc inficēšanās, un tās paliek organismā vairākas nedēļas. Šīs analīzes jutīgums pārsniedz bakterioloģisko pētījumu metodi. Titrs 1:80 apstiprina difterijas klātbūtni organismā.

Dizentērijas marķieris RPHA visprecīzāk nosaka šigelozi (bacilāro dizentēriju), pat salīdzinot ar laboratorijas diagnostikas metodi, izmantojot baktēriju kultūru. Ja pacients nesaņem kvalitatīvu ārstēšanu, tad slimība pāriet hroniskā procesā, kurā bieži notiek recidīvi. Analīze ļauj diagnosticēt caurejas akūtu un hronisku fāzi, identificēt dizentērijas izraisītāju, atšķirt bakteriālo šigelozi no kolorektālā vēža, endokrīnās sistēmas traucējumiem vai resnās zarnas iekaisumu. Negatīvā reakcija norāda uz baciļa neesamību un apstiprina tā klātbūtni ar titru 1:80 zīdaiņiem vai 1:320 pieaugušajiem.

Pētījuma veikšana ar masalu marķieri ļauj noteikt slimību ar masalām. Šāda pārbaude var būt alternatīva bieži veiktajai HI analīzei masalu diagnosticēšanai.

Tātad, RPHA asins analīze - kas tas ir? Apkopojot, mēs varam droši teikt, ka šī ir moderna, ļoti jutīga un uzticama metode dažādu bakterioloģiskās etioloģijas slimību diagnosticēšanai.

Saskarsmē ar

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija

Hemaglutinācijas reakcija

Aglutinācijas reakcija

Aglutinācijas reakcija (RA) ir mikrobu vai citu šūnu aglutinācija un izgulsnēšanās antivielu iedarbībā elektrolīta (izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma) klātbūtnē. Iegūtās nogulsnes sauc aglutināt.

Reakcijai jums ir nepieciešams:

1. Antivielas (aglutinīni) - atrodas pacienta serumā vai imūnserumā.

2. Antigēns - dzīvu vai nogalinātu mikroorganismu, eritrocītu vai citu šūnu suspensija.

3. Izotoniskais šķīdums.

Aglutinācijas reakciju serodiagnostikai plaši izmanto vēdertīfam, paratīfam (Vidal reakcija), brucelozei (Raita reakcija) utt. pacienta serums, un antigēns ir zināms mikrobs.

Kad tiek identificēti mikrobi vai citas šūnas, to suspensija kalpo kā antigēns, un zināms imūnserums kalpo kā antiviela. Šo reakciju plaši izmanto zarnu infekciju, garā klepus u.c. diagnostikā.

Laboratorijas praksē tiek izmantotas divas hemaglutinācijas reakcijas (RHA), kas atšķiras pēc to darbības mehānisma.

Pirmā RGA attiecas uz seroloģiju. Šajā reakcijā eritrocīti tiek aglutinēti, mijiedarbojoties ar attiecīgajām antivielām (hemaglutinīniem). Reakciju plaši izmanto asins grupu noteikšanai.

Otrā RGA nav seroloģisks. Tajā sarkano asinsķermenīšu līmēšanu izraisa nevis antivielas, bet gan īpašas vīrusu veidotas vielas. Piemēram, gripas vīruss aglutinē vistu un jūrascūciņu eritrocītus, poliomielīta vīruss – aitu eritrocītus. Šī reakcija ļauj spriest par konkrēta vīrusa klātbūtni testa materiālā.

Tā ir seroloģiska reakcija, kurā specifiskas pretvīrusu antivielas, mijiedarbojoties ar vīrusu (antigēnu), to neitralizē un atņem tam spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas, t.i., kavē hemaglutinācijas reakciju. Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcijas (HITA) augstā specifika ļauj to izmantot, lai noteiktu HA laikā atklāto vīrusu veidu un pat veidu.

Rīsi. Pasīvās hemaglutinācijas (RPHA) reakcijas shēma. A - eritrocītu diagnostikas iegūšana; B - RNGA: 1-eritrocīts: 2 - pētītais antigēns; 3 - eritrocītu diagnostika; 4 - antiviela pret pētīto antigēnu: 5 - aglutināts.

Ar RNHA palīdzību var noteikt nezināmu antigēnu, ja uz eritrocītiem adsorbējas zināmas antivielas.